Etablierung und Evaluierung mikrobbiologischer und molekularbiologischer Methoden zur Detektion von Mikroorganismen im dentalen Plaque-Biofilm.

Die klassischen mikrobiologischen Ausplattierverfahren zur Detektion von Mikroorganismen in komplexen Habitaten wie dem dentalen Plaque-Biofilm können wegen der Selektion bestimmter Organismen ungenaue Ergebnisse liefern. Neben Methoden, die auf der Ploymerasekettenreaktion (PCR) basieren, werden Fluoreszenz in situ Hybridisierungsverfahren entwickelt und zur Charakterisierung der Mikroflora in der dentalen Plaque angewandt. Die Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) ist eine mikrobiologische Detektionsmethode, die Mikroorganismen ohne Zerstörung ihres Habitats qualitativ und quantitativ bestimmt. Diese Methode beruht auf der Hybridisierung einzelsträngiger DNA-Oligonucleotide auf die passende Sequenz der ribosomalen RNA (rRNA) in den Bakterienzellen. Die rRNA hat sich als ein geeigneter phylogenetischer Marker für die Bakterientaxonomie erwiesen. Dies erlaubt das Design von spezifischen Sonden für verschiedene phylogenetische Ebenen im Reich der Bakterien (Eubacteria, Gattung und Art). Durch die Kombination der FISH mit konfokaler Laserscanningmikroskopie (CLSM) können verschiedene Plaquebakterien gleichzeitig quantifiziert werden. Somit kann die Dynamik und die Rolle wichtiger Mikroorganismen für die initiale Adhäsion sowie die Koaggregation bei der Entstehung des dentalen Plaque-Biofilms untersucht werden. Verschiedene spezifische Gensonden wurden mit unterschiedlichen Fluoreszenzfarbstoffen modifiziert und auf ihre Eignung als Multiplex-FISH getestet. Nach Etablierung der Methode wurde die Dynamik dieser Mikroorganismen in situ untersucht. Es konnte gezeigt werden, dass Multiplex-FISH ein bisher noch nicht ausgeschöpftes Potential für die mikrobiologische Untersuchung des dentalen Plaque-Biofilmes hat.

Ansprechpartner: Dr. Ali Al-Ahmad
Tel: +49 (0)761 270 4894
Email: ali.al-ahmad@uniklinik-freiburg.de

Projektbeginn: 2005
Projektende: (unbegrenzt)

Dr. Ali Al-Ahmad
Stellvertretung: Prof. Dr. N. Arweiler
Albert-Ludwigs-Universität Freiburg
Department für Zahn- Mund- und Kieferheilkunde
Klinik für Zahnerhaltungskunde und Paradontologie
Hugstetterstrasse 55
79106 Freiburg

Telefon: +49 (0) 761 270 49570
Fax: +49 (0) 761 270 47620
Email: petra.hess@uniklinik-freiburg.de
http://www.zahnerhaltung.uniklinik-freiburg.de

• Al-Ahmad A, Auschill TM, Braun G, Hellwig E, Arweiler NB: Overestimation of Streptococcus mutans prevalence by nested PCR detection of the 16S rRNA gene. J Med Microbiol, 2006; 55: 109-113.